Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
3. Сравнение с разбавленным раствором основного вещества.
4. Метод стандартных добавок. К анализируемой пробе прибавляют известное количество примеси. По данным хроматографирования испытуемой пробы и испытуемой пробы с добавкой определяют содержание примеси. Для повышения точности возможно использование метода внутреннего стандарта.
# Пригодность хроматографической системы. Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы». Данный тест обычно проводят с использованием растворов сравнения.
Если нет других указаний в частной статье, хроматографическая система считается пригодной при выполнении следующих условий:
- относительные времена удерживания указанных веществ должны быть около регламентируемых значений;
- число теоретических тарелок (эффективность хроматографической системы), рассчитанное по указанному пику, должно быть не менее регламентируемой величины;
- коэффициент разделения указанных пиков, рассчитанный из
хроматограмм раствора сравнения, должен быть не менее указанной величины;
- относительное стандартное отклонение, рассчитанное для высоты или площади указанного пика или их отношений к высоте или площади внутреннего стандарта из хроматограмм раствора сравнения, должно быть не более указанной величины; для расчета относительного стандартного отклонения используют данные пяти параллельных хроматограмм;
- коэффициент симметрии указанного пика, рассчитанный из хроматограмм раствора сравнения, должен быть в пределах, указанных в частной статье.
Для обеспечения выполнения требований теста «Проверка пригодности хроматографической системы» допускается модификация хроматографических условий, описанных в частной статье.
2.2.30. ЭКСКЛЮЗИОННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Эксклюзионная хроматография представляет собой хроматографический метод, в котором процесс распределения молекул в растворе происходит в соответствии с их размерами. В случае использования органической подвижной фазы метод называют гель-проникающей хроматографией, а в случае использования водной подвижной фазы - гель-фильтрационной хроматографией. Проба вводится в колонку, заполненную гелем или пористыми частичками наполнителя, и переносится подвижной фазой через колонку. Распределение в соответствии с размерами происходит в процессе движения и многоразовых обменов молекул растворенного вещества между молекулами растворителя (подвижной фазы) и тем же самым растворителем, находящимся в порах материала, которым заполнена колонка. Диапазон размеров распределенных молекул определяется диапазоном размеров пор наполнителя.
Достаточно маленькие молекулы, способные проникать во все поры материала, элюируются в полном объеме колонки (Vt - полный проникающий объем или граница эксклюзии). Молекулы с размерами, превышающими размер всех пор материала колонки, мигрируют лишь сквозь простор между частицами наполнителя, не препятствуя им, и элюируются в свободном объеме колонки (Vo - объем эксклюзии или мертвый объем). Распределение молекул в соответствии с размерами происходит между свободным объемом и полным объемом колонки; наиболее эффективное распределение происходит в первые две трети даного диапазона.
Оборудование. Специфичной частью оборудования является хроматографическая колонка подходящих размеров, заполненная материалом, который обеспечивает распределение молекул соответствующих размеров в необходимом диапазоне. Если необходимо, колонку термостатируют. Через колонку с постоянной скоростью пропускают элюент. К одному концу колонки обычно присоединяют приспособление для введения пробы, например, инжектор с прерывателем потока, шприцевой инжектор с мембраной для введения пробы без приостановки потока или петлевой инжектор с клапаном, который перекрывает поток. К этому же концу колонки также может быть присоединен соответствующий насос для подачи элюента с контролируемой скоростью. Проба может также наноситься непосредственно на сухую поверхность материала колонки или, если вязкость пробы превышает вязкость элюента, проба может наслаиваться на поверхность материала колонки под элюент. Другой конец колонки обычно присоединяют к соответствующему детектору с приспособлением, регистрирующим и обеспечивающим контроль соответствующих концентраций распределенных компонентов пробы. Обычно используют детекторы: фотометрический, рефрактометрический или
люминесцентный. При необходимости, может быть присоединен автоматический коллектор фракций.
В качестве наполнителя может использоваться или мягкий материал, такой как набухший гель, или твердый, такой как пористое стекло, силикагель или подходящий для данного растворителя поперечно-сшитый органический полимер. При использовании твердых материалов обычно применяют принудительную подачу подвижной фазы под давлением, что ускоряет разделение. Подвижную фазу выбирают исходя из природы пробы, наполнителя и метода детектирования.
Указания по обработке материала для заполнения колонки перед выполнением распределения и наполнения колонки представлены в соответствующей частной статье или инструкции изготовителя.
